可吸收防粘连液的生物安全性评价

宁夏医学杂志 2017年 l1月第 39卷第 11期 NingxiaMedJ,Nov.2017,V0l39,No.11

可吸收防粘连液的生物安全性评价

 张 岩 ,郑紫燕,张晓敏

      [摘要] 目的 对可吸收防粘连液进行生物学安全性评价 ,为产品成功应用于临床提供依据。方法 参照 GB/T16886(医疗器械生物学评价标准》的要求,对可吸收防粘连液进行热原试验、体外细胞毒性试验、迟发型超敏 反应试验、急性全身毒性试验、溶血试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)、体外哺乳动物细胞染色体畸 变试验 及小 鼠淋 巴瘤细胞基因突变试验 (mLA试验 )等生物相容性试验研 究。结果 可吸收防粘连液经热 原检测 最高升温0.1oC,无致热性,细胞毒性 1级,急性全身毒性反应阴性,迟发型超敏反应阴性 ,遗传毒性检测均为阴性。 以市售医用几丁糖为对照品 ,经 动物血液 学一 般检 验 、生 化检验 ,试验组与对 照组相 比无统计 学差 异 (P>0.05), 动物体重/脏器系数与对照组相比无统计学差异(P>0.05),结果显示无亚慢性全身毒性。结论  可吸收防粘连 液具有 良好 的生物相容性和生物学安全性 ,可 为产 品应 用于临床提供 依据。
      [关键词] 可吸收防粘连液;褐藻寡糖;海藻酸钠;热原试验;细胞毒性试验
      [中图分类号] R965.3 [文献标识码] B

 
可吸收防粘连液是由天然海洋植物褐藻经生物 酶解反应提取 的褐藻寡糖、海 藻酸钠等高分子材料 精制而成的液状胶体。研究 表明,褐藻寡糖具有抗 氧化 、抑 菌 、抗肿瘤及增强免疫调节等生物活 性¨I4J。海藻酸钠 为天 然高分子聚合物 ,生物相容 性 良好 ,可在体内降解 ,毒性低 ,来源广泛 ,作为药用 辅料应用越来越广泛 J。羧 甲基纤维素钠对活性 物质具有 良好 的包载能力 ,可用作针剂的乳化稳定 剂和片剂 的粘结剂 ,还可作为载体材料用于活性物 质的控制释放 ,经实验证 明还是可靠的抗癌药物载 体 J。本研究按照 GB/T16886(医疗器械生物学评 价标准》的要求 ,采用细胞毒性试验 、致敏试验 、皮 内 刺激反应试验、急性全身毒性试验、溶血试验 、遗传 毒性试验 、热原试验、植入试验及亚慢性毒性试验对 可吸收防粘连液进行生物学安全性评价。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 动物 :本试验于2015年3月在北京医疗器械监督检 验 中心开展 ,所用动物均由该单位提供 。其中家兔 3只,昆明小鼠 5只 ,豚鼠 3O只,SD大鼠46只,雌雄不限。
1.1.2 试药 :可吸收防粘连液 [中英 阿诺康 (宁夏 ) 生物科技有 限公 司生产 ,批号 :15012901]。
1.2 买验方法
1.2.1 热原试验 :将样品与生理盐水1:2比例稀释 后 ,按照 0.1g/mL的比例 ,(37±1)℃条件下浸 提 (72±2)h,以无菌无热原的生理盐水为浸提介质 ,按 照《中国药典)2010版(二部)附录Ⅺ D的方法进行 测试 ,结果应无热原反应。
1.2.2 细胞毒性试验 :将样品与生理盐水1:2比例 稀释 ,取稀释液按照 0.1g/mL的比例 ,使用细胞完 全培养基 ,在(37±1)cc条件下浸提 24h,按照 GB/T 16886.5—2003中 8.2浸提液试验规定 MTF方法进 行试验 ,结果应不 >1级。
1.2.3 急性全身毒性试验 :将样 品与生理盐水 1:2 比例稀释 ,取稀释液按照 0.1g/mL的比例 ,在生理 盐水中(37±1)℃条件下浸提 (72±2)h,按照 GB/T 16886.11—2011中第 五章规定试验方法 ,采用 A.8 尾静脉注射途径进行试验 ,结果应无急性全身毒性。 1.2.4 迟 发型超敏 反应试验 :将样 品与生 理盐水 1:2比例稀释 ,取稀释液按照 0.1g/mL的 比例 ,在生 理盐水中 (37±1)qC条 件 下浸 提 (72±2)h,按 照 GB/T16886.10—2005中 7.4最大剂量试验规定进 行试验 ,根据 GB/T16886.10—2005中 7.4.6对试 验结果进行评价 ,结果应无迟发型超敏反应 。
1.2.5 遗传毒性试验
1.2.5.1 鼠伤寒沙 门氏菌回复 突变试验 (Ames试验),将样品与生理盐水 1:2比例稀释 ,取稀释液按 照 0.1g/mL的比例 ,分别以生理盐水和 DMSO为浸 提介质 ,(37±1)o【=条件下浸提(72±2)h,按照 GB/ T16886.3—2008中规定 的方法进行试验,结果应为 阴性 。
1.2.5.2 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 :将样 品与生 理盐 水 1:2比例 稀 释,取 稀 释液 按 照 0.1 g/mL的比例 ,以细胞完全培养基为浸提介质 ,(37± 1)qC条件下浸提 24h,根据 GB/T16886.3—2008中 规定的方法进行试验 ,结果应为阴性。
1.2.5.3 小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(fn】 试验), 将样品与生理盐水 1:2比例稀释,取稀释液按照 0.1g/ mL的比例 ,以细胞完全培养基为浸提介质 ,(37±1)℃ 条件下浸提 24h,根据 GB/T16886.3—2008中规定的 方法进行试验 ,结果应为阴性。
1.2.6 溶血试 验 :按照 GB/T14233.2—2005中第 七章规定的方法进行试验 ,溶血率应不 >5%。
1.2.7 植入试验:以大小适宜的 PE软管作为载体,将 样品附着其上,按照 GB/T16886.6—1997中第四章规 定采用皮下组织植入方式进行试验 ,植入期为12周 ,与对照组相 比,样品组应无明显局部生物学反应。
1.2.8 亚慢性毒性试验 :将样 品与生理盐水 1:2比 例稀释,取稀释液按照 0.1g/mL的 比例,以生理盐水为浸提介质 ,(37±1)qC条件下浸提 (72±2)h,按 照 GB/T16886.11—2011中第六章规定试验方法 , 采用 A.7腹腔注射 90d方法进行试验 ,与对照组相 比,样品组应无 明显亚慢性毒性反应 。
1.3 统计学方法:用 SPSS13.0统计软件 ,计量资料用360截图20220411172915631.jpg ±s表示 ,比较采用组间独立样本 t检验 ,以 P< 0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 热原试验 :在 3h观察时间内 ,3只家兔体温升 高值的总数在 1.3℃以下 ,符合 《中国药典》可接受 的限度范围 ,试验材料无致热性。
2.2 细胞毒性试验 :在本试验条件下 ,被检试验材 料细胞毒性 1级。
2.3 急 全身毒 }生试验 :所有动物在整个试验观察过 程中表现正常,没有出现死亡现象,体重均在可接受的 范围内,表明被检试验材料急性全身毒性反应阴性。
2.4 迟 发 型超敏反 应试 验 :动物经 激发 (24±2) h,去除敷贴后 24h和 48h分别观察试验组和对 照 组动物激发部位皮肤 过敏情况 ,结果 显示 动物皮 肤 反应记分均 为 0分 ,即无皮 肤红斑和水肿反应情况 ,表明可 吸收防粘连液迟发型超敏反应阴性 。
2.5 遗传毒性试验
2.5.1 鼠伤寒 沙门氏菌 回复突变 试验 (Ames试 验 ):在本试验条件下 ,被检试验材料的生理盐水浸提液对鼠伤寒沙门氏菌 TA97、TA98、TA100、TA102 诱变阴性。
2.5.2 体外哺乳动物细胞染色体 畸变试验 :在本试 验条件下,试验材料浸提液 的染色体 畸变率低 于阴 性对照组 ,试验结果阴性。
2.5.3 小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(rnI 试验):在 本试验条件下 ,被检样品小 鼠淋巴瘤细胞(L5178Y)TK 基因突变试验结果阴性,覆盖两个终点。
2.6 溶血试验 :根据医疗器械预期 临床用途和器械材料特性确定适宜的合格判定指标。按本试验检验 医疗器械时 ,合格判定指标一般为溶血率应 <5%。 在本试验条件下 ,样 品溶血率为 3.5% ,符合医疗器械的溶血试验要求 。
2.7 植入试验 :与对照组相 比,样 品在皮下植入 l2 周后无明显局部生物学反应。
2.8 亚慢性毒性试验 :动物血液学一般检验 、生化 检验 ,试 验 组与对照组 相 比无统计学差异 (P> 0.05),试验组大鼠丙氨 酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和钾浓度低于对照组 ,肌酐高于对照组 ,差异有统计学意义 (P<0.05),但 以上指标的结果 在本试验室参考区间。动物体重/脏器系数与对照组相比差异无统计学意义 (P>0.05),说明样 品组无明显的亚慢性毒性反应 ,见表 l一表 3。

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3 讨论
      本研究按照 GB/T16886(医疗器械生物学评价 标准》的要求 ,采用热原 、细胞毒性 、致敏、皮 内刺激 反应 、急性全身毒性、溶血 、遗传 毒性 (Ames试验 、体 外哺乳动物细胞染色体畸变试验和 mLA试验 )、植 入及亚慢性全身毒性试验对制备的可吸收防粘连液 进行生物学安全性评价。结果显示 :在 3h观察时间 内,3只家兔体温升高值 的总数在 1.3oC以下 ,符合 《中国药典》可接受的限度范 围,无致热性。在本试 验条件下 ,可吸收防粘连液的细胞毒性 1级 ,急性全 身毒性反应阴性 ,迟发型超敏反应 阴性 ,可吸收防粘 连液的生理盐 水浸 提液对 鼠伤寒 沙 门氏菌 TA97、 TA98、TA100、TA102诱 变阴性 ,染 色体畸变率低 于阴性对照组 ,试验结果阴性。在本试验条件下 ,可吸 收防粘连液对小鼠淋巴瘤 细胞 (L5178Y)TK基因突 变试验结果 阴性 。在本试验条件下 ,样 品溶血率 为 3.5% ,符合医疗器械 的溶血试验要求。与对照组 相 比,样品在皮下植 入 12周后无 明显局部生物学反 应 。动物血液学一般检验 、生化检验 ,试验组与对 照 组相 比无 统计 学差异 (P>0.05),样 品无亚慢性毒 性 ,因此 ,结果证明可吸收防粘连液具有良好的生物相容性。
      防粘连产品对人体应安全 ,不能对人体组织 、血 液 、免疫等系统产生不良反应 。产品所使用材料 的 生物相容性优劣是防粘连产品研究设计 中首先考虑 的重要问题。理想的防粘连产品应具有 良好的生物 相容性、自动黏附性 、可降解 吸收性 、足够的体内存留时间、促进伤口愈合并将纤维组织增生降至最低程度等特性。可吸收防粘连液是由天然海洋植物褐 藻经生物酶解反应提取的褐藻寡糖 、海藻酸钠等高分子材料精制而成 的液状胶体 ,适用于预防和减少盆腹腔粘连的发生。本研究结果表明,可吸收防粘连液具有良好的生物相容性 ,然而 ,要想将可吸收防粘连液应用于临床 ,还需进一步对其安全性进 行验证 。

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